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噬菌体展示技术平台

贵州福彩网从B淋巴细胞中扩增全套抗体的轻链和重链基因文库,经噬菌体表面展示系统表达后形成的噬菌体文库即为噬菌体抗体库(phage antibody library)。根据免疫球蛋白基因不同家族的可变区基因序列设计引物,用来扩增抗体分子的Fab基因或Fv基因,通过与噬菌体外壳蛋白基因连接,以融合蛋白的形式表达在噬菌体表面,从而形成噬菌体抗体,具有局部三维结构。好的抗体库需要具有高库容量,可以保障抗体的结构多样性。利用相应的抗原就可从浩瀚的生物分子海洋中寻找或筛选出与之相互作用的抗体分子。

贵州福彩网噬菌体抗体库可以分为三类:天然噬菌体抗体库,半合成抗体库,人工合成抗体库。通过基因工程技术从B淋巴细胞基因组中提取的抗体基因构建的噬菌体抗体库为天然抗体库。基于天然抗体库的框架区以及CDR1和CDR2区,通过随机合成扩增CDR3区的DNA序列得到半合成抗体库。而人工合成抗体库则是通过抗体基因信息设计并合成的纯人工抗体库。

噬菌体抗体库的主要参数为库容量和多样性。在机体内,抗体多样性主要来源于三方面:一是胚系B细胞因遗传所固有的,约为4.5×106;二是B细胞个体发生过程中CDR3的变化,可达1014;三是B细胞接触抗原后基因发生突变。通常认为107个特异性抗体分子便能够识别99%的抗原决定簇,因此几乎可以认为机体产生的抗体能够有效识别各种抗原。当抗体库的库容量达到108时,理论上就有可能得到针对任意抗原的特异性抗体。

理论上天然噬菌体抗体库的多样性最多可达到1012(人),人工合成抗体库的多样性可以达到1013~1014,但筛选到的抗体有时失去了人的种属特性不能应用在人体,在合适的筛选条件下,几乎可以从中筛选到针对任何一种靶抗原的特异性抗体。由于电穿孔转化连接产物效率在107左右,欲得到109以上的抗体库,需要增加转化次数,可能要经过上百次积累库容。

公司经过多年的实践积累,采用优化的克隆系统、电转化、酶切、连接等反应步骤,可以制备高库容量天然抗体库。本公司已有库容量分别达2×1011,5×1010和4×1012的全人Fab 抗体库, 全人ScFV抗体库和半合成抗体库,以及从特定病人B细胞中提取的免疫性抗体基因制备的3×108免疫抗体库,可用蛋白固相筛选法或细胞筛选法获得高亲和全人源抗体。同时本公司亦可定制高库容量的全人源天然抗体库和全人源半合成抗体库。

抗体库构建基本流程示意图:

噬菌体库构建流程图

  


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